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莊盟生物

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產(chǎn)品名稱:KM71H菌株

貨號(hào) 規(guī)格 價(jià)格 訂購(gòu)數(shù)量 是否現(xiàn)貨
ZK274 0.3ml/支 870 - + 有貨

產(chǎn)品介紹

KM71H是畢赤酵母菌株,屬于真核細(xì)胞。一般的針對(duì)原核生物的抗生素例如卡那和氨芐對(duì)酵母是無(wú)效的,因此為了防止大腸桿菌等原核生物對(duì)酵母培養(yǎng)菌株污染,往往會(huì)在培養(yǎng)基中加入一些氨芐和卡那霉素的抗生素,來(lái)抑制細(xì)菌菌的污染和生長(zhǎng)。

KM71H畢赤酵母被推薦用來(lái)表達(dá)含有Zeocin抗性的載體載體重組質(zhì)粒,例如pPICZ A,B,C系列的載體。

在篩選KM71H重組轉(zhuǎn)化菌株時(shí),Zeocin抗生素的工作濃度是100μg/ml。

KM71H宿主菌中的AOX1基因含有一個(gè)片段缺失,當(dāng)pPICZ A,B,C或者pPICZα A,B,C轉(zhuǎn)化到KM71H中時(shí)只能產(chǎn)生出MutS轉(zhuǎn)化株,不必在進(jìn)行Mut基因型的篩選了。

KM71H的來(lái)源母細(xì)胞在精氨琥珀酸裂解酶基因(arg4)含有一個(gè)突變,這使得菌株無(wú)法在不含有精氨酸的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)。而KM71H酵母細(xì)胞中在AOX1基因處插入了一個(gè)正常的arg4基因,從而形成了KM71H的MutS, Arg+表型。

將約2kb的Arg4基因克隆出來(lái)后插入到KM71H來(lái)源菌株內(nèi)的野生型的AOX1基因的BamH I(16bp)和Sal I(227bp)中間,從而構(gòu)建成功KM71H。ARG4基因直接替換了AOX1基因的16-227片段序列。

KM71H畢赤酵母細(xì)胞的優(yōu)點(diǎn)是不需要利用甲醇minimal media篩選菌株的Mut基因型,因?yàn)樗械霓D(zhuǎn)化株都是MutS菌株。另外,AOX1基因并沒(méi)有被完全刪除,理論上你可以用自己的基因替換其中的Arg4基因,從而生成MutS, Arg-的轉(zhuǎn)化株,但是由于實(shí)驗(yàn)表明該基因型酵母菌株在含有精氨酸的minimal media上并不能很好的生長(zhǎng),所以并不鼓勵(lì)大家進(jìn)行這種基因替換嘗試。

基因型:

aox1::ARG4, arg4


基本信息

培養(yǎng)基:

YPDA

菌株類別:

酵母菌

培養(yǎng)條件:

28℃,有氧,YPDA

質(zhì)粒轉(zhuǎn)化:

電激

保存方式:

30%甘油,-80℃

基本應(yīng)用:

用于蛋白表達(dá)

備注:

可參考 Invitrogen C18200


使用方法

建議超凈臺(tái)內(nèi)劃線涂板,得到單克隆后再進(jìn)行其他實(shí)驗(yàn)操作,避免雜菌污染。


注意事項(xiàng)

1. 酵母菌在YPD培養(yǎng)基上會(huì)變粉,是正?,F(xiàn)象,可以由此特性鑒別是否為酵母菌。

2. 酵母菌種化凍1-2次活性下降,不建議直接長(zhǎng)期保存。  

3. 活化保種的種管建議分裝保存,反復(fù)凍融菌株活力下降。

4. 本產(chǎn)品僅可用于實(shí)驗(yàn)室研究,不能用于動(dòng)物,人體以及作為食品添加劑等用途。

5. 為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

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